PVDF膜在使用前以下關鍵處理步驟，以確保其最佳蛋白結合性能和實驗結果的可靠性：

一、剪裁與防護

尺寸匹配：用干凈剪刀將PVDF膜剪成略大于凝膠的尺寸（邊緣多出1-2mm）。

防污染：全程佩戴無粉手套操作，避免手指直接接觸膜表面（油脂或蛋白污染會導致高背景）。

二、甲醇活化（關鍵步驟）

目的：破除PVDF膜的疏水性，使其變為親水狀態，便于蛋白結合。

操作：

將PVDF膜浸入100%甲醇中，全部浸潤（約10-30秒）。

持續浸泡 1-2分鐘（時間不足會導致活化不全，過長可能損傷膜結構）。

原理：甲醇溶解PVDF膜表面氟碳鏈，暴露極性基團，增強親水性。

三、 轉移緩沖液平衡

步驟：

將活化后的PVDF膜從甲醇中取出，立即浸入 轉膜緩沖液（如Tris-Glycine含20%甲醇）中。

平衡時間 ≥5分鐘，期間輕搖去除殘留甲醇。

注意：

若緩沖液不含甲醇（如半干轉條件），需改用純水或對應緩沖液平衡。

平衡不充分會導致轉膜時甲醇殘留干擾電場穩定性。

四、可選預處理（特殊需求）

SDS預潤濕：對高分子量蛋白（＞150kDa），可短暫浸泡含0.1% SDS的轉膜緩沖液（增強蛋白轉移效率）。

PVDF膜再生：若重復使用舊膜，需先以0.1M NaOH浸泡15分鐘，純水沖洗后再活化。

五、關鍵注意事項

通過規范處理，PVDF膜可有效結合蛋白質（結合量達150-200μg/cm2），同時降低非特異性吸附，確保Western Blot、蛋白測序等實驗的靈敏度和重復性。

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