影響免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？

更新時(shí)間：2023-10-08

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免疫熒光染色技術(shù)是一種以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合生物化學(xué)技術(shù)和顯微技術(shù)發(fā)展而來(lái)的蛋白等分子檢測(cè)技術(shù)。那么你知道影響免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、免疫熒光染色方法的選擇

免疫熒光染色技術(shù)分為直接法和間接法。

直接法：將熒光標(biāo)記物偶聯(lián)在抗原/抗體上，直接與相應(yīng)的抗體/抗原反應(yīng)。

間接法：先用未標(biāo)記的一抗與抗原充分反應(yīng)后，再利用熒光標(biāo)記的二抗與已經(jīng)結(jié)合在抗原上的一抗結(jié)合，達(dá)到檢測(cè)抗原的目的。

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
直接法	操作簡(jiǎn)單、特異性高，非特異性染色少便于相同宿主來(lái)源的不同蛋白的共定位	靈敏性相對(duì)比間接法低
間接法	靈敏度高，染色更加靈活，成本低。	相對(duì)直接法操作復(fù)雜

二、抗體的選擇

與目標(biāo)蛋白直接結(jié)合的一抗，在條件允許的條件下，盡量選擇相同來(lái)源的免疫原或者選擇已驗(yàn)證種屬反應(yīng)性的抗體。

如果進(jìn)行不同目標(biāo)蛋白的雙染或多染時(shí)，這些不同蛋白所對(duì)應(yīng)的一抗應(yīng)該來(lái)源于不同宿主。

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
單克隆抗體	特異性高	靈敏度相對(duì)較低，制備過(guò)程復(fù)雜，價(jià)格也相對(duì)較高
多克隆抗體	制備過(guò)程簡(jiǎn)單，周期短，價(jià)格相對(duì)較低，靈敏度更高，對(duì)于表達(dá)量較低的目標(biāo)蛋白更容易檢出。	特異性相對(duì)較低